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细胞培养 | MCF-7(Human breast cancer cells)



人乳腺癌细胞(Human breast cancer cells)MCF-7是从一名69岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离得到,为贴壁上皮样细胞。MCF-7保留了分化乳腺上皮的许多特征,常用于乳腺癌生物学研究,乳腺癌抗癌药物筛选等方面研究。

MCF-7细胞

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细胞培养方法

1.培养基


89%MEM培养基;10%胎牛血清(FBS);1%青霉素-链霉素(P/S);其他细胞添加剂


2.复苏

(1)解冻:用镊子将冻存管浸于37 ℃水浴;反复摇晃,迅速完成解冻;

(2)离心:喷洒75%酒精消毒后,在无菌环境下,打开冻存瓶,用移液器将细胞连同冻存液移至含1 mL完全培养基的10 mL离心管中,室温1200 rpm离心3-5 min,细胞沉于离心管底部;

(3)培养:将上清液轻轻弃去,加2 mL完全培养基,轻柔悬起细胞,然后将所有细胞悬液移至含有3 mL完全培养基的T25培养瓶中,于37℃,5% 二氧化碳培养箱中培养;

(4)观察:每日观察细胞生长状态(培养基颜色、细胞贴壁情况、形态与密度等)并拍照。

3.传代

细胞密度达80%-90%开始传代

(1)清洗:无菌下吸出培养基,用37 ℃预热的PBS清洗一次;

(2)消化:加1 mL 0.25%胰蛋白酶消化液,转动培养瓶令其浸润所有细胞,室温(或37 ℃)消化,显微镜下观察到细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回超净台,轻敲几下培养瓶后加1 mL完全培养基终止消化;

(3)离心:用移液器轻柔吹匀后然后将悬液转移至10mL离心管中,在1200 rpm离心3-5 min;

(4)培养:无菌下弃上清液,加1 mL完全培养基悬起细胞并移至T25培养瓶中;按1:2-1:3比例添加完全培养基,用移液器轻柔吹匀后,分装至培养瓶中,于37 ℃,5% 二氧化碳培养箱中培养。


MCF-7细胞特点


成团簇的生长

由于MCF-7细胞是三维团簇的方式生长,复苏和传代后会重新附着为三维岛(会有一些不会重新附着的簇)。生长最终会从岛屿状慢慢扩散开来,随着时间的推移,细胞会缓慢变成单层,这个时候细胞基本处于对数生长期。


生长缓慢

MCF-7人乳腺癌细胞是一种本身生长缓慢的细胞,传代培养时注意细胞密度。当细胞培养至细胞 70~80% 的汇合度,即可进行分瓶处理,一般T25培养瓶建议1:2传代,每周可传代2~3次,如果细胞生长速度比正常的时候更慢,可以适当提高血清浓度。


贴壁率低

MCF-7细胞在复苏、传代后,细胞会有一些漂浮状态,这些漂浮细胞是正常现象。一般复苏、传代培养3天后漂浮细胞会再继续粘附贴壁,直到生长从岛屿扩散开来并且在培养瓶内伸展开,通常在进行换液的时候我们会补加培养基,如果一定要全换液,可以通过离心收集悬浮细胞,并将悬浮细胞接种到新培养瓶中。

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