1. 细胞来源
NK-92（Natural killer-92 cells）是一种永生化的自然杀伤细胞，最初是从一位50岁男性患者的外周血中分离而来，他患有急性非霍奇金淋巴瘤—一种起源于淋巴组织的恶性肿瘤，由发现该疾病的医师“托马斯·霍奇金”的姓氏命名。细胞悬浮生长，呈现聚团状。
作为一种永生化的免疫细胞，NK-92对多种白血病、淋巴瘤和骨髓瘤细胞系具有杀伤作用，广泛应用于抗肿瘤治疗以及针对细胞杀伤活性和特异性的基因工程改造等研究中。
2. 生长特性
A. NK-92为悬浮细胞，细胞圆亮，喜聚团生长，聚团越多，细胞活力越好。
B. 细胞生长依赖于IL-2，若培养液中缺少IL-2，细胞很容易死亡。
C. 细胞对离心力较为敏感，高速离心会影响细胞生长状态。
NK-92（货号：C5225）
3. 培养细节
A. 复苏
复苏初期，细胞松散且活力欠佳，可“竖瓶培养”以增加细胞局部密度，在复苏后的24h内尽量不要晃动或移动细胞。24h后可向培养瓶中补加适量新鲜培养液，待细胞密度上来后再横瓶静置培养。
B. 传代
该细胞推荐传代比例为1∶2-1∶3。当细胞密度达到80%以上时，可根据培养基的颜色选用直接分瓶传代（培养基颜色偏红）或收集细胞离心后再传代（培养基颜色偏黄）。
C. 换液
培养过程中，培养基颜色变黄但细胞密度不到80%、镜下观察细胞团数量不多时，要及时补液（以维持细胞所需营养）。
由于NK-92细胞对离心较为敏感，还可采用“半换液法”：换液前将细胞瓶竖瓶静置15-30min左右，待细胞完全沉淀下来后，小心吸取上层培养基后弃掉，再补加适量新鲜培养液。
D. 冻存
NK-92细胞对于冻存技术要求较高，冻存前细胞活力要高于90%，且细胞圆亮，状态良好，处于对数生长期；离心后要轻柔吹散混匀，避免用力过大导致 细胞膜破裂，影响细胞活率。推荐使用9:1的冻存液比例进行冻存（90%FBS+10%DMSO），且细胞冻存数量最好高于2*10^6/mL。
——注意——
该细胞生长依赖于IL-2。IL-2不仅能促进NK细胞的增殖，还能增强细胞的溶解活性。IL-2容易降解，配制好的完全培养基注意及时分装并保存于4℃，尽量两周内用完。
Q & A
A 细胞成团时是否需要吹散？
NK-92细胞本身偏向于聚团生长，相较于松散细胞，聚团的细胞活性更高。对于不是特别大的细胞团则无需吹散，当细胞团过大时，为了防止中间细胞因汲取营养不足导致细胞死亡，轻柔吹散细胞团即可。
B 培养过程中发现松散的细胞间隙有黑色颗粒怎么处理？
培养基中黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物，一般不会影响细胞的生长状态。当培养液中黑色颗粒较多时，可通过800-1000/rpm离心3 min去除。
C 实验操作规范，培养两三天后细胞状态仍不佳且不增殖是什么原因？
这种情况就要考虑是不是培养基的原因了，培养基中IL-2很不稳定，若培养基放置的时间过久，IL-2的降解会导致细胞增殖速度变缓甚至细胞死亡。当细胞状态不佳或者不增殖时，可额外向培养基中按照200U/mL补加IL-2。
