| 适用范围 | 试剂 |
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| 使用方法 | （一） 细胞冻存 1. 取对数生长期的细胞，去除旧培养液，加入 PBS 清洗细胞； 2. 去除 PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面） 室温孵育 2~3 min，把单层生长细胞消化下来； 3. 加入双倍体积的完全培养基或胰酶终止剂终止细胞消化（如果冻存细胞为悬浮细胞按照步骤 4-8 进行操作）； 4. 将消化后的细胞悬液或者悬浮细胞液转移至离心管中，进行细胞计数； 5. 室温 1000 rpm 离心 5 min；弃掉上清液； 6. 加入适量 4℃预冷的无血清细胞冻存液重悬细胞沉淀，制成细胞悬液（按照细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存液的量，推荐冻存密度：5x105 至 1x107cells/mL； 7. 将细胞分装入冻存管中，每管 1～1.5 ml； 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者等信息； 8. 针对常规肿瘤细胞：将冻存液重悬后的细胞直接放入-80℃冰箱，过夜后转入至液氮罐中 长期保存。针对难养或珍贵细胞：将冻存液重悬后的细胞放入程序降温盒，或者程序降温后再放入-80℃冰箱，过夜后转入至液氮罐中长期保存。 （二） 细胞复苏 1. 将水浴锅温度调至 37℃，取出冻存管快速置于水浴锅内，晃动冻存管直至管中冻存细胞融化成液体； 2. 将溶解的细胞冻存悬液转移至含有 5-10 倍体积完全培养基的离心管中，待冻存管中细胞完全融化后，将冻存细胞悬液缓慢加入离心管中，轻轻混匀； 3. 室温 1000 rpm 离心 5 min； 去除上清液，加入已回温的完全培养基重悬细胞，进行细胞计数，根据计数结果，取适量的细胞悬液接种到新的培养瓶内； 4. 将培养瓶转移至 37℃，5% CO2 培养箱中，按常规方法培养。 |
| 注意事项 | 1. 试剂包装如有破损或滴漏，严禁使用。 2. 请遵守严格无菌的工作规范，操作过程避免污染。 3. 使用前应详细阅读使用说明书，在有效期内使用。 4. 本产品含有 DMSO，建议用户在低温条件下（4℃或冰上）进行操作，冻存细胞后应尽量减少冻存细胞在外存放时间，尽快按照步骤移入-80℃冰箱保存。 5. 部分对 DMSO 敏感的细胞，建议使用本产品前对其进行试验性冻存、复苏、培养，确认细胞性能后再进行正式冻存。 6. 该产品在室温条件下放置的时间不宜过长，以免影响冻存效率。 |
| 声明 | 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 |
| 保存条件 | 2°C-8°C保存，有效期18个月。 |
