| 适用范围 | 试剂 |
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| 使用方法 | 免疫抑制小鼠成瘤实验： 1. 将 BDBIO 高浓度基质胶置于冰中并在 4℃过夜融化，使用预冷的移液管或吸头混合基质 胶至均匀状态。 2. 收集细胞悬液，调整细胞密度为 2x106 个/ml，置于冰上待用（收集的细胞宜在 1 小时内 接种完毕）。 3. 将 BDBIO 细胞悬液与基质胶按照 1:1 的比例混匀，通常 250µl 含有 2x106 个细胞/ml 的 冰预冷细胞悬液与 250µl 冰预冷的高浓度基质胶混合（注射体积及细胞密度根据实际实 验条件确定）。 4. 使用实验动物电动剃毛器对小鼠注射部位皮肤进行脱毛，然后用酒精棉球进行消毒，用 1ml 注射器将细胞悬液与基质胶混合液吸入注射器，进行皮下注射。 5. 注射完毕的小鼠继续饲养约 1-3 周可观察成瘤效果。 注：成瘤效果受细胞状态，小鼠周龄大小，免疫排斥，接种部位等因素的影响，可能会导致 荷瘤不成功的情况。 薄胶成胶方法： 1. 将高浓度基质胶置于冰上融化后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状，可根据需要进 行稀释后使用。 2. 将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为 50μl/cm2 生长面积的基质胶。 3. 在 37℃放置 30 分钟，即可使用。 厚胶成胶方法： 1. 将高浓度基质胶置于冰上融化后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状，可根据需要进 行稀释后使用。 2. 将需要使用的培养板置于冰浴，将培养的细胞与基质胶混合，用移液枪头使其悬浮于基质 中。加入浓度为 150-200μl/cm2 生长面积的基质胶。 3. 在 37℃放置 30 分钟，可成胶。可以加入细胞培养的基质，也可使细胞直接生长在胶表面。 薄层包被方法： 1. 将高浓度基质胶置于冰上融化后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。 2. 根据使用需要，采用无血清培养基稀释基质胶，根据实验需要确定最佳包被浓度。 3. 将稀释的基质胶包被于所需的培养器皿中，包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。室温下 孵育 1 小时。 4. 去除未结合的基质胶，用无血清培养基轻轻地冲洗。 类器官培养方法： 1. 用适量的 4℃过夜解冻的高浓度基质胶重悬细胞或组织沉淀（也可根据实验条件进行稀释 后使用），推荐重悬密度为每 50μl 基质胶悬液包含 1×105 个细胞，重悬后可置于冰上， 重悬时间不超过 30s 以避免基质胶过早凝固。基质胶稀释比例应在 70%以上以保证培养 过程中基质胶的结构稳定性。 2. 将基质胶和组织细胞的混合悬液点入预热的 24 孔板底部正中央，每孔 30μl 左右，避免 悬液接触孔板侧壁。为防止基质胶室温凝固，此步骤应尽快完成。 3. 将接种完成后的培养板至于 37℃二氧化碳恒温培养箱中，孵育 15min 左右待基质胶凝固。 4. 待基质胶完全凝固后，沿壁缓慢加入类器官培养基，24 孔板每孔 500ul，避免破坏已凝 固结构。 5. 将 24 孔板置于 37℃二氧化碳培养箱中培养。 6. 每 3 天更换一次培养基，更换培养基时应避免破坏基质胶。 胚胎干细胞 ES 和诱导多能干细胞 iPS 培养： 1. 在冰上融化基质胶，可根据实验条件稀释后使用。 2. 在 50ml 离心管中加入 24ml 的预冷的 DMEM/F-12，并且放在冰上。 3. 将解融的基质胶按一定稀释比例加入到预冷的 DMEM/F-12 中（在 50ml 离心管中）， 混匀。 4. 稀释好的基质胶溶液必须立即使用，进行培养皿的包被。 5. 轻轻晃动培养皿，将基质胶溶液均匀的覆盖到培养皿的表面。 1. 注意：如果培养皿的表面没有被基质胶溶液完全覆盖，则不能用于人 ES 和 iPS 细胞培养。 6. 培养皿使用前至少在室温（15-25°C）孵育 1 个小时，不可使基质胶蒸发。 2. 注意：如果不是立即使用，包被好的培养皿必须密封防止基质胶溶液的蒸发，包被后可以 在 2-8°C 放置一周。在使用之前，至少在室温（15-25°C）中放置 30 分钟恢复到室温。 7. 轻轻的将培养皿的一侧倾斜，使多余的基质胶溶液在一侧的边缘汇聚。通过移液器或者泵 吸取多余的基质胶溶液。确保包被的表面没有被刮到。 8. 加入 ES 或 iPS 细胞置于 37℃二氧化碳培养箱中培养。 |
| 注意事项 | 1. 收到产品并确认到货情况无异常后，请将基质胶储存于-80℃冰箱，短暂使用可置于-20℃ 冰箱。切勿将基质胶储存于自动除霜的冰箱中。在第一次融化后请分装保存，应避免基质 胶反复冻融。 2. 因基质胶在 10℃以上即可成胶，在操作过程中，保持基质胶一直置于冰上，所有接触的 细胞培养器皿，移液吸头，分装管等都必须预冷后使用。 3. 所有操作均需在无菌环境下进行，试剂瓶瓶盖可用 70％乙醇擦拭，并自然干燥。应使用 预冷的移液器以保证基质胶呈匀浆状。 4. 本产品在实际使用过程中须根据实验目的进行条件优化。 |
| 声明 | 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 |
| 保存条件 |
