| 适用范围 | 试剂 |
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| 使用方法 | 一、组织样本预处理 1. 使用镊子去除肠道外部的肠系膜、血管和脂肪，将肠段放入10cm培养皿中，培养皿置于冰盒上，加入2mL预冷DPBS-PS（DPBS溶液中加入1% PS），使用DPBS-PS 轻轻冲洗肠段。用剪刀将肠段纵向切开，肠腔朝上打开，使用预冷DPBS-PS反复轻轻洗涤肠段至清洗液澄清。 *如新鲜标本无法立即处理，组织标本应浸泡在组织保存液中，建议使用组织运输保存液，冰上运输尽快处理。 2. 准备装有15mL预冷DPBS-PS的50mL离心管，用镊子夹住肠段一端，悬挂于离心管口，将肠段剪成2-5mm小段，使肠段落入管内液体中。 3. 使用10mL移液管轻轻上下吹打肠道片段三次，静置后轻轻吸出上清液，加入15mL预冷DPBS-PS。重复上述步骤15-20次，直至上清液澄清。 二、样本消化 1. 消化液配制：准备24.9mL DPBS-PS，加入100μL 肠类器官组织消化液（250X），现配现用。 2. 清洗后的组织200g，离心3min，弃上清，向组织沉淀中加入肠类器官组织消化液25mL（1X)，摇床室温消化15-20 min，取部分于显微镜下观察肠隐窝情况。（该步骤的消化时间可能会根据标本的情况进行调整） 3. 加入4mL DPBS-PS终止消化，200g，离心3 min，弃上清，加入DPBS-PS重悬。 三、收集细胞 1. 准备一支装有70μm滤网的50mL洁净离心管，使用移液管将混悬液通过70μm滤网过滤（可适当倾斜或轻微碰撞过滤器，使其快速过滤），以去除多余的绒毛，收集滤液。丢弃滤网并将滤液放置于冰上，标记为“馏分1”。重复上述步骤，将组织片段重悬于10mL预冷DPBS-PS中，滤网过滤后获得馏分2-4，放置于冰上。 2. 在2-8℃下将各馏分290g，离心5min，弃上清液，将沉淀保留在每个管中。将各试管中的沉淀重悬于10mL预冷DPBS-PS中，分别转移到干净的15mL离心管中，并标记对应的馏分序号，在2-8℃下200g，离心3min，弃上清，保留肠隐窝沉淀。 |
| 注意事项 | 1. 本产品使用过程中应注意无菌操作，避免污染。 2. 试剂包装如有破损或滴漏，严禁使用。 3. 为保持本产品的最佳使用效果，请勿进行反复冻融处理； 4. 不同组织使用本产品的消化状态会有差异，根据标本的具体情况进行调整。 |
| 声明 | 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 |
| 保存条件 | 2-8℃保存，有效期12个月。 |
