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建立自己独有的细胞库,是怎样的姿势?

1951年,当Henrietta Lacks女士寻求治疗时,研究人员在她不知情的情况下,从她的身体中提取活检样本,然而来自Lacks女士的细胞没有像过往获得的细胞一样迅速在实验室内死亡,她的细胞快速地进行大量增殖……由此她的细胞成为了第一个“永生”细胞系,现在被称为HeLa细胞[1]。



    无论您是否知道这个传奇故事,但作为生物研究工作者,对“HeLa”这个名词一定都有所耳闻,它是细胞系的代表。经过70多年,HeLa细胞系已被发展了18000代,扩增的细胞总质量达到了5000万吨。目前还没有任何一种细胞系可以比拟HeLa细胞系,无论是使用的广泛性和来源的传奇性。




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    我们都知道,细胞系是生物科研人了解微观生命活动的窗口。细胞系可以是研究对象本身,可以是科研工具,可以是生产平台;或是在科研,或是在医学,或是在疫苗工厂,处处有细胞系的“发挥空间”。




图2:细胞培养的关键里程碑[2]




    如同物种多样性,拥有更多种类的细胞系,似乎也同时拥有了更多的基因突变多样性,以及跟多的疾病表征模型。ATCC,DSMZ,CCTCC…种类规模越大的细胞库就越被科研人艳羡,也在情理之中。




    拥有一个庞大的细胞库,也是实验室发展的战略资源之一。那么建立好实验室独一无二的细胞库,应该拥有什么觉悟呢?





吸取历史经验教训




无意间细胞交叉污染


    细胞培养操作过程中,无意间的细胞交叉污染(比如搭台操作,细胞标识错误或者细胞来源不清)是一种严重的、普遍的且长期存在的问题。

    如前言所提到的HeLa,在 20 世纪 70 年代就污染了全世界的大部分细胞和细胞库[3]。而如今,这种交叉污染问题实际并未根除(图3,随着每年文献发表量以及引用量的增加,和历史遗留问题,涉及交叉污染的文献数量反而逐年增加)。

    为了应对日益严重的交叉污染问题,NIH、ATCC以及多家权威期刊,多次呼吁,要求研究者对细胞进行STR鉴定[4](这可能意味着,在您递交文章投稿的同时,也要递交文中所用细胞的STR报告,届时再发现细胞存在交叉污染,后果不堪设想)。




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图3:历年受污染原始文献的分布情况[4]




    差之毫厘,失之千里,因此,在进行建立细胞库这种源头工作中,对于入库细胞的“背调”尤为重要。百迪科技所有交付人源细胞经由STR鉴定,保证您建立细胞库的源头准确。




支原体污染


    细胞的三个主要微生物污染来源中,支原体污染无疑是隐蔽性最高的,能传播,且难以清除。支原体污染可能出现在培养过程中的任何环节,包括细胞株源头,不良的操作习惯,生物安全柜中的层流和气溶胶等等。支原体可以影响细胞的表型和功能特征,包括:染色体畸变、DNA/RNA合成、膜抗原性变化(细胞性质发生变化)、抑制细胞增殖和代谢(细胞长得慢)、转染效率降低、基因表达谱的变化(实验无法重复)、细胞死亡。

    支原体污染需要早发现早预防[5],因此,建库引入细胞,无疑是防止支原体污染最有效的一环。百迪科技采用cGMP细胞房管理标准,对细胞采用PCR和间接染色双重检测法,确保无支原体污染




战略发展眼光



    作为实验室长期发展的战略资源,建立细胞库的眼光需长远,细胞系品类多,细胞系“年轻化”都是需要重点考虑的。



建库细胞种类多


    培养成本低,易操作,无限扩增,无伦理问题等优点,使细胞系成为最常用的疾病模型。这就意味着,细胞组织来源越多,实验室就有越多不同组织疾病的表征手段。而同一组织来源的多种细胞,其实验数据可互相验证,提高实验数据质量。更重要的是,不同的细胞系可能具有不同的突变基因或药敏性(图4),对于疾病的表征更为真实这一点在新药开发过程中尤为重要。




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图4:不同NSCLC细胞系对EGFR抑制剂具有不同药敏性[6]




细胞系“年轻态”


    虽然传统观念认为,细胞代数对于有限细胞的影响更大,但ATCC的一份技术文档显示,高代数的细胞系在形态、对刺激的反应、生长速率、蛋白质表达和转染效率方面都不同于低代数细胞系[7]。甚至,Nat Biotechnol.期刊一文显示,同一个来源的HeLa细胞系,12代和14代的细胞之间就有731个基因的表达存在显著差异,并且有166个反应到了蛋白水平上[8]。细胞系代数对于实验重复性的影响,可见一斑。避免使用传代次数过多的细胞系,对于实验结果的可靠性和重复性是十分必要的。因此,百迪科技建议广大实验者,建立细胞库的过程中,要在原始细胞库和主细胞库中保存足够多的细胞系拷贝数量(主细胞库拷贝份数至少10-20 个,且只用于保存,不用于开发)[9]。




更省心的选择-百迪科技细胞库



    百迪科技只采用Working Cell Banks第一代细胞发货,保证细胞系“年轻态”。可提供超1200种细胞系,700种原代细胞,全面覆盖常用细胞。同时,我们也提供基因编辑细胞,为您的实验细胞模型提供无限可能。



配套解决方案


    百迪科技拥有一个强大的实验团队,不仅提供细胞系,同时还配套最适合细胞系的培养条件,均经过百迪自有细胞实验室测试,细胞系拿到即养




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    同时,百迪科技提供细胞培养试剂:胎牛血清,基础培养基,缓冲液,胰酶,抗生素等等,一站式全套打包购。

    如您需要细胞实验服务,可同时咨询和购买服务方案,省心省力。




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本文参考文献

[1] https://news.un.org/zh/story/2021/10/1092722

[2] https://www.intechopen.com/chapters/53566

[3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/6451928/

[4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29023500/

[5]https://www.atcc.org/the science/authentication/mycoplasma-contamination

[6] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/27514773/

[7] PASSAGE NUMBER EFFECTS IN CELL LINES

[8] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30778230/

[9] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25117809/



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