细胞来源

人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells）HUVEC来源于新生儿脐带静脉血管的内皮，具有典型的“鹅卵石”状形态。

HUVEC细胞常用于血管生成等相关的研究。（百迪细胞库产品货号：C5192）

生长特性：

1. HUVEC为贴壁细胞、呈内皮细胞样，具有典型的“鹅卵石”状形态。

2. 原代HUVEC细胞在体外生长缓慢，传代次数有限。

3. 细胞在传代过程中很难保持稳定状态，随着传代次数增多，细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的表达逐步下降。

图片来源：ATCC

培养细节：

① 培养瓶包被：

细胞培养前，细胞瓶要用包被液进行包被，置于37℃培养箱中至少2小时或过夜；包被完成后吸出包被液即可接种细胞；稀释后的包被液(可4℃保存一周)可回收使用一次。包被液可促进细胞贴壁及生长。

包被液推荐使用重组人纤连蛋白包被液。

② 细胞复苏：

细胞复苏后16小时内不要干扰培养，第二天更换以去除残留的DMSO和未附着的细胞，一般推荐在18-24小时内换液。此后每2-3天更换一次，直到细胞融合至70%左右，状态较好的情况下会形成鹅卵石或纺锤形形态、无颗粒细胞质，一旦细胞量达到70%，每隔一天更换培养基，直到细胞融合至90%左右。

③ 细胞清洗：

一般推荐使用不含钙镁离子的DPBS（货号：L204-500）进行清洗。

④ 细胞消化：

该细胞消化时，胰酶浓度不宜过高，否则会影响细胞外的标志物，一般推荐的胰酶浓度为0.05%（货号：A302-500）。该细胞对消化较为敏感，消化时应避免消化过度，一般消化时间为3-4min，注意观察细胞形态，细胞变圆变亮时即可加入含血清的培养基终止消化。

⑤ 细胞分散：

该细胞尤其脆弱，吹打时不可用力过大。吹打应使用粗口枪头或粗口胶头滴管，轻柔吹打10-20次直至细胞颗颗分明即可。

⑥ 细胞传代：

细胞推荐1:2传代，传代后16小时内不要干扰培养，18小时后换液，此后隔天换一次液，细胞生长不能过密，一般融合至80%-90%时即可操作。

⑦ 细胞冻存：

推荐冻存配方为90% FBS+10% DMSO。

注意

该细胞为原代细胞，传代次数有限。细胞传代比例过高或传代次数过多、以及反复冻存都会影响细胞状态，加速细胞老化，建议从实验开始一直1:2培养至实验结束。

图片来源：百迪细胞库

Q&A：

问题一  HUVEC不贴壁怎么办？

首先细胞瓶一定要包被，包被液可提高细胞贴壁效果；

其次培养基中要添加HUVEC细胞生长因子；

然后不能消化过度，HUVEC消化过程中可能会出现第一层细胞下来了，还有一层细胞还在“顽强贴壁”中，此时可分两次进行消化。

问题二  HUVEC出现多角形、触角怎么办？

一般出现这种情况就得看看培养体系是否合适了，培养基的酸碱度是否合适，一般推荐pH 7.0-7.2左右；

还有就是该细胞对血清质量要求较高，尽可能使用进口血清；

细胞生长过程中，还需添加细胞生长因子，提供细胞状态。推荐使用HUVEC专用完全培养基。