| 适用范围 | 适用于CHO-DG44、CHO-K1、CHO-S和CHO-GS等CHO 胞系的高效大规模培养。 |
|---|---|
| 使用方法 | 细胞传代： 1. 37℃水浴预热 CHO 无血清完全培养基； 2. 从培养箱中取出摇瓶，取少量细胞悬液进行细胞密度及活力检测； 3. 按照密度为3-5×105/ml个细胞接种至新的摇瓶中，置于37℃、CO2含量为5%-8%的培养 箱中，摇床( 振幅50mm,转速110-120rpm）上培养。 4. 当活细胞密度≥4×106时进行传代，使用新鲜CHO无血清培养基按3-5×105/ml重悬细胞， 并将细胞接种至新摇瓶。 培养基适应（大部分情况不需要）： 直接适应 1. 将细胞直接稀释到预热的CHO培养基中，活细胞密度为3-5×105/ml，转移到合适的培养 容器中。 2. 置于培养箱，监测细胞生长情况。如果使用直接适应法观察到细胞生长不理想，则使用顺 序适应法。 顺序适应 1. 细胞以3-5×105/ml 的密度接种至含1/3 CHO无血清培养基和2/3原培养基的培养瓶中， 置于37℃、5%-8% CO2培养箱中培养。 2. 当细胞密度达到4×106/ml，以3-5×105/ml 的密度进行传代，接种至含2/3 CHO无血清 培养基和1/3原培养基中培养。 3. 当细胞密度达到4×106/ml，以3-5×105/ml个活细胞密度进行传代，接种至含100% CHO无血清培养基中培养。 4. 使用100% CHO无血清完全培养基继续传代几次后，活细胞数应超过4×106/mL， 培养4-6天存活率≥90%，此时被认为培养基适应已经完成。 瞬时转染： 1. 在瞬转开始之前，细胞应完全适应CHO无血清培养基，CHO细胞生长状态正常，传代倍 增时间稳定（一般20-24h），细胞活率维持95%以上，方可进行瞬转测试。 2. 配置DNA-PEI 核酸-转染试剂复合物(DNA：1.5mg/L，PEI：7.5mg/L），室温孵育15- 20min。 3. 转染时调整活细胞密度为6 x106 cells/ml（离心去掉旧培养液，改用新培养基最佳），并 在Day1加入1.5mM 丙戊酸钠。转染之后的整个培养过程中，应该密切注意细胞活率和 密度，在Day1-3-5-7-9-11添加5%补料进行高密度高产量表达，葡萄糖按需添加。 4. 当细胞活率低于80%，培养结束，收取上清液，纯化目标产物。 5. （培养过程中参数建议如下：初始培养温度36.5℃，Day1温度降低至32~33℃，pH:7.1 ±0.2，DO：40%。摇床转速120rpm，振幅50mm, 5-8%CO2 ）。 |
| 注意事项 | 1. 液体细胞培养基应置于2～8℃避光保存。 2. 针对不同的细胞株，由于代谢或对营养物质的需求不同，需要针对性的优化补料量，以更 好的提高表达量。 |
| 声明 | 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 |
| 保存条件 | CHO添加物：-20℃储存，有效期 |
浙江百迪生物科技有限公司（简称“百迪科技”）成立于 2019 年，公司聚集于生物细胞培养领域。2023 年新百迪全面扩容，目前是国内首家集细胞培养区域三大产品管线——细胞、细胞培养试剂、耗材于一体的全领域产品生产制造商。百迪坚持自研自产，从源头开始，重视细节，严控质量，目标成为行业领先的卓越产品生产和服务商。
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