| 适用范围 | 适用于 Essential 8 系统和 mTeSR 系统培养的人多能干细胞的增殖，如胚胎和诱导性人多能干细胞 (PSC) 等。 |
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| 使用方法 | 人多能干细胞培养基制备： 1. 将 Advance 人多能干细胞基础培养基提前恢复至室温，添加剂解冻后翻转混匀。 2. 然后将 100ml 添加剂无菌转移到 400ml Advance 人多能干细胞基础培养基，混匀得到完全培养基。 3. 配制好的完全培养基可在 2°C-8°C 下储存 2 周。 人多能干细胞复苏： 1. 提前用基质胶包被 6 孔板，每孔内加入 1ml 基质胶轻轻晃动使其完全覆盖皿底，置于 37℃ 培养箱中孵育1h~2h，实验前拿出并置于生物安全柜中室温下平衡 20 min。 2. 将 Advance 多能干细胞完全培养基提前预热，取 5~10ml 加入 15ml 离心管中备用。 3. 将冻存的多能干细胞从液氮中取出，37°C 水浴中快速融化，当只剩下一块小冰晶时，将冻存管从水浴中取出，喷洒 70%的乙醇，然后放在生物安全柜中。 4. 将解冻的细胞转移到提前备好的含完全培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 3min。 5. 丢弃上清液，并将细胞沉淀重悬于 2ml 完全培养基混匀，将细胞悬液缓慢添加到基质胶包被的 6 孔板中，6 孔板的每个孔接种密度约 100 万个活细胞。 6. 轻轻晃动 6 孔板使细胞均匀分布，置于 37℃，5%CO2 培养箱培养。 7. 第 2 天观察细胞贴壁情况，更换新鲜培养基，此后每天更换培养基，直到细胞长至约 85% 汇合度。 人多能干细胞传代： 1. 将 Advance 人多能干细胞培养基及消化液提前预热。 2. 弃掉原有培养基，贴壁缓慢加入 DPBS 清洗，然后沿培养皿边缘吸去 DPBS 缓冲液。 3. 每孔加入 1-2ml 人多能干细胞消化液使之覆盖皿底，并置于室温孵育 5-8min 或在 37°C下孵育 4-5min（消化时间依据干细胞生长密度，消化时间略有不同，消化过程中可在显微镜下观察细胞消化情况，若在显微镜下观察到大部分克隆边缘以及克隆内部细胞间出现间隙，即可吸掉消化液终止消化）。 4. 将消化液吸掉后，加入 2ml Advance 人多能干细胞培养基，用移液枪轻柔吹打 3~5 次，使皿底干细胞集落脱落，并将其并转移到 15mL 离心管中，少量残余的细胞集落没有脱落属于正常现象。 5. 添加适当体积的预热完全培养基到基质胶包被的 6 孔板中，将细胞悬浮液混匀后按一定比例接种至孔板中，轻轻晃动 6 孔板使细胞均匀分布，置于 37°C、5%CO2培养箱中培养过夜。 6. 第 2 天观察细胞贴壁情况，更换新鲜培养基，此后每天更换培养基，直到细胞长至约 85% 汇合度。 人多能干细胞冻存： 1. 将 Advance 人多能干细胞培养基及消化液提前预热。 2. 弃掉原有培养基，贴壁缓慢加入 DPBS 清洗，然后沿培养皿边缘吸去 DPBS 缓冲液。 3. 每孔加入 1-2ml 人多能干细胞消化液使之覆盖皿底，并置于室温孵育 5-8min，或在 37°C 下孵育 4-5min。 4. 将消化液吸掉后，加入 2ml Advance 人多能干细胞培养基，用移液枪轻柔吹打 3~5 次，使皿底干细胞集落脱落，并将其并转移到 15ml 离心管中，1000rpm 离心 3min。 5. 弃上清，加入无血清干细胞冻存液重悬，轻轻吹打混匀，转入到冻存管中。 6. -80℃冰箱冻存过夜后转入液氮中长期保存。 |
| 注意事项 | 1. Advance 人多能干细胞培养基添加剂在室温或 2-8℃解冻，避免反复冻融。 2. 配制好的 Advance 人多能干细胞完全培养基可在 2°C-8°C 下储存 2 周。 3. 传代后可见细胞碎片和小菌落是正常现象。 4. 使用本产品时应严格按照无菌操作的规程进行操作。 |
| 声明 | 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 |
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sales@biocode.cn
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