适用范围 | 适用于免疫细胞、外周血 PBMC、人类干细胞和肿瘤细胞等无血清培养体系较敏感细胞的冻存,同时适用于含血清培养体系细胞的冻存。 |
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使用方法 | (一) 细胞冻存 1. 取对数生长期的细胞,去除旧培养液,加入 PBS 清洗细胞; 2. 去除 PBS,加入适量胰蛋白酶(覆盖培养皿表面) 室温孵育 2~3 min,把单层生长细胞消化下来; 3. 加入双倍体积的完全培养基或胰酶终止剂终止细胞消化(如果冻存细胞为悬浮细胞按照步骤 4-8 进行操作); 4. 将消化后的细胞悬液或者悬浮细胞液转移至离心管中,进行细胞计数; 5. 室温 1000 rpm 离心 5 min;弃掉上清液。 6. 加入提前预冷好的无血清细胞冻存液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,调节冻存液中细胞的最终密度为 5×105/ml~1×107/ml; 7. 将细胞分装入冻存管中,每管 1~1.5 ml; 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者; 8. 将冻存细胞放入-80℃冰箱,24h 后转入移至-196℃液氮罐长期冷冻保存。 (二) 细胞复苏 1. 将水浴锅温度调至 37℃,取出冻存管快速置于水浴锅内,晃动冻存管直至管中冻存细胞融化成液体; 2. 将溶解的细胞冻存悬液转移至含有 5-10 倍体积完全培养基的离心管中,待冻存管中细胞完全融化后,将冻存细胞悬液缓慢加入离心管中,轻轻混匀; 3. 室温 1000 rpm 离心 5 min; 去除上清液,加入已回温的完全培养基重悬细胞,进行细胞计数,根据计数结果,取适量的细胞悬液接种到新的培养瓶内; 4. 将复苏好的细胞转移至 37℃,5% CO2培养箱中,按常规方法培养。 |
注意事项 | 1. 试剂包装如有破损或滴漏,严禁使用。 2. 请遵守严格无菌的工作规范,操作过程避免污染。 3. 使用前应详细阅读使用说明书,在有效期内使用,开瓶后应在 3 个月内使用完毕。 |
声明 | 仅用于科研使用,不能用于临床诊断和治疗。 |
保存条件 | 2-8℃保存12个月;-20℃以下保存3年。 |
外观 | 淡红色透明液体 |
浓度 | 7.0-7.7 |
有效期 | 1000-1500 |