适用范围 | 适用于多种来源人间充质干细胞的生长和扩增。终止胰蛋白酶消化作用。 |
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使用方法 | 1. 吸去旧培养液,将瓶内剩余的组织块去净后,根据培养瓶规格适当加入 1-5ml 重组胰酶 (产品货号:A309-500)置 37℃培养箱中消化 1-2 分钟,或室温消化 3-5 分钟,显微 镜下观察到绝大部分细胞变圆,极少量细胞贴壁仍呈纺锤形,极少量细胞已经悬浮即可 终止消化。 注意:对于人间充质干细胞,尤其是利用该体系培养的细胞而言,其消化脱壁的时间应 该较短,难以消化脱壁的细胞多数可能不是间充质干细胞,而是单核巨噬细胞等杂细胞。 2. 立即加入与胰酶替代物等体积胰酶终止液(产品货号:A308-100),用吸管吸取液体, 反复吹打培养器瓶底壁,使细胞彻底脱离瓶皿底壁。 3. 吸出培养瓶内所有液体,水平离心(250g,10 分钟),弃去上清液。 4. 用 2-3ml 间充质干细胞的完全培养液重悬细胞。 5. 以 106 个细胞接种至 T175 培养瓶中,加入 40ml 完全培养基,放置于 37℃、5%CO2 、 95% 湿度的二氧化碳培养箱中,培养 72 小时,培养期间无需换液补液。 注意:不可让间充质干细胞完全融合或过度融合,否则将会导致以下问题: a) 细胞生长接触抑制; b) 消化后细胞成片脱落,悬液中出现团块; c) 干细胞自发分化。这些问题将严重影响细胞的生长状态。 6. 培养 72 小时后可收获 107 个细胞。 |
注意事项 | 1. 本产品使用过程中应注意无菌操作,避免污染。 2. 试剂包装如有破损或滴漏,严禁使用。 3. 为保持本产品的最佳使用效果,请勿进行反复冻融; |
声明 | 仅用于科研使用,不能用于临床诊断和治疗。 |
保存条件 | |
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